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IL-17的检测
IL-17是新近被确认的一种细胞因子，由T细胞，主要是CD4+T细胞产生，其靶细胞广泛。可激活转录因子NF-KB，诱导纤维母细胞产生IL-6、ID8、GM-CSF、和膜性细胞间粘附分子1（1CAM-1），促进由亚适剂量PHA所诱导的T细胞增殖。目前编码IL-17及其受体的基因核苷酸序列已被部分测定。
（1）IL-17的诱导：取人PBMC或纯化的CD4+T细胞，加入诱导剂（PMA 5ng／mL+ionomycin 3ug／mL，或ConA 63ug／mL，或抗CD28抗体+CD3抗体），37℃孵育48—72h。收集培养上清液检测IL-17含量（ELISA法）或生物学活性。
（2）IL-17生物学活性检测：通过诱导类风湿性关节炎滑膜细胞或肾癌上皮细胞株（TUMT或CHA）产生IL-6、IL-8或GM-CSF可以检测IL-17的活性。
1）滑膜细胞的制备：外科切取关节滑膜，剪碎后用4ug／mL胶原酶消化，37~C孵育2～3h，单个细胞悬液用培养液培养。细胞贴壁后，洗去未粘附细胞。待细胞生长至汇合，用*消化传代。一般采用3—8代的滑膜成纤维样细胞作为检测用靶细胞。
2）取96孔细胞培养板，每孔依次加人104滑膜细胞或是TUMT细胞（或CHA细胞），不同稀释度的IL-17待测样品，总体积为200uL，置370（2 5％C02温箱中孵育48h，收集上清，置-20℃保存以备检测细胞因子活性。用ELISA法或生物学活性测定法检测上清液中的II-6、IL-8或GM-CSF等细胞因子的含量或活性，以此推测IL-17的活性。
关键词：
IL-17的检测
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